Je dois réfléchir sur un protocole ELISA indirect.


Cela concerne une recherche d'anticorps spécifiques, par exemple viraux ou bactériens.
Les cupules d'une barette sont sensibilisées par l'antigène viral ou bactérien.

Il s'agit de titrer un échantillon.
On étalonne à partir d'une solution d'anticorps dont le titre est connu,   en effectuant des dilutions successives au demi.

Je n'ai pas compris comment à été choisie la cupule appelée blanc réactif, située en A1. On me demande de mettre du tampon à la place d'une solution contenant l'anticorps.

Puis, c'est là que le bât blesse, il ne faut pas ajouter de conjugué marqué à la peroxydase, ni le chromogène! A la fin on lit la densité optique en même temps que les autres cupules.


On réalise en A2 un autre témoin appelé témoin de fixation non spécifiquedu conjugué.
Je suppose, mais c'est à moi de le trouver, qu'il faut mettre du tampon au lieu d'une solution contenant l'anticorps (étalon ou échantillon inconnu), puis du conjugué  puis du chromogène.

Mes questions sont les suivantes :à quoi sert A1, car A2 semble un témoin plus pertinent? Quelle densité optique faut il soustraire des densités mesurées pour l'étalon et l'échantillon? A1 ou A2 ?
Il me semble que A2 est meilleurs.

Merci de vos lumières.